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原裝ELISA試劑盒與酶免elisa的區(qū)別
更新時(shí)間:2013-11-28   點(diǎn)擊次數(shù):1471次

   原裝ELISA試劑盒與酶免elisa的原理:
   酶免elisa是應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠載脂蛋白M(APO-M)水平。用純化的大鼠載脂蛋白M(APO-M)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入載脂蛋白M(APO-M),再與HRP標(biāo)記的載脂蛋白M(APO-M)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。ELISA試劑盒顏色的深淺和樣品中的載脂蛋白M(APO-M)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠載脂蛋白M(APO-M)濃度。
   原裝ELISA試劑盒的基本原理:
1)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
2)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。

   原裝ELISA試劑盒與酶免elisa使用須知:
酶免elisa使用須知:
1)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2)試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3)請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
4)封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5)濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
6)各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,ELISA試劑盒以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
7)所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
8)本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
9)底物請(qǐng)避光保存。
原裝ELISA試劑盒使用須知:
1)顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
2)免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
3)定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。
4)研究抗酶抗體的合成。

   他們可能存在的弊端:
ELISA是目前應(yīng)用zui廣泛的免疫標(biāo)記檢測(cè)方法。但由于ELISA自身存在的缺陷和某些人為因素都可造成實(shí)驗(yàn)性誤(漏)診的發(fā)生,分析引起實(shí)驗(yàn)誤差因素:
1)試劑的運(yùn)輸與貯存ELISA試劑盒熱穩(wěn)定性差,遇熱后靈敏度、特異性都將降低。在37℃下放置1d相當(dāng)于4℃~10℃保存1.6個(gè)月,而ELISA試劑盒的貨架壽命只有6個(gè)月,這樣就要求試劑盒的在4℃~10℃下運(yùn)輸貯存,各實(shí)驗(yàn)室老師在試劑盒貯存環(huán)節(jié)上都能達(dá)到要求,但目前尚無(wú)法保證試劑盒的冷鏈運(yùn)輸,在炎熱的夏季,試劑盒經(jīng)過(guò)幾天的高溫,ELISA試劑盒長(zhǎng)途運(yùn)輸,其貨架壽命也將消耗殆進(jìn),如各實(shí)驗(yàn)室還按試劑說(shuō)明書(shū)的有效期使用至6個(gè)月,將無(wú)法保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2)試劑盒質(zhì)量試劑盒質(zhì)量是關(guān)系到ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度的核心問(wèn)題,目前ELISA試劑盒的廠家和品牌眾多,產(chǎn)品質(zhì)量也參差不齊。

上海通蔚生物科技有限公司

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