在ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶聯(lián)絡(luò)物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不可濺起，不可發(fā)生氣泡。加標(biāo)本通常用微量加樣器，按規(guī)矩的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，防止發(fā)作交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。
在處理和保存方面ELISA試劑盒要考慮以下幾個方面：
1.要注意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有相似過氧化物的活性，因此，在以HRP為符號酶的ELISA試劑盒測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，從而與后邊加入的HRP底物反響顯色。
2.血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則能夠在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長期保存，應(yīng)在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生破壞效果，ELISA試劑盒從而引起假陰性成果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振動，重復(fù)倒置混勻即可。
4.樣本的采集及血清別離中要注意盡量防止菌污染，一則菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作符號的測定辦法發(fā)生非特異性干擾。
5.標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉積后取上清檢測。
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